Версия для печатиСпортивная медицина » Специалистам » Новости » Новости спортивной науки » Новейшие стратегии обнаружения анаболических агент

Новейшие стратегии обнаружения анаболических агентов и защита от непреднамеренного приема запрещенных препаратов


Более половины из запрещенных веществ, обнаруживаемых при допинг-тестах, составляют анаболические агенты. Они используются во всех видах спорта, так как влияют на гипертрофию мышц, увеличение силы, а также ускорение восстановления и предотвращение катаболизма при напряженных тренировках.

Запрещенный список Всемирного Антидопингового Агентства (WADA) относит к анаболическим агентам экзогенные анаболические андрогенные стероиды (ААС) - станозолол, метандиенон, оксандролон и др.; эндогенные ААС - тестостерон, дегидроэпиандростерон, андростендион и др., а также иные вещества, такие как кленбутерол и селективные модуляторы андрогенных рецепторов.

Проведение допинг-анализа осложняют различные факторы: применение еще неопознанных или новых, специально разработанных препаратов, распространение эндогенных веществ, уменьшение концентрации аналитов в положительных пробах (из-за использования микродоз и заблаговременного прекращения приема перед анализом) и генетический полиморфизм, который приводит к различающимся метаболическим профилям у тестируемых.

Помимо этого, большой проблемой являются так называемые «допинг-ловушки», когда спортсмен не использовал запрещенные препараты намеренно, но получает положительный результат в допинг-тесте. К этому могут приводить, в частности, спортивные пищевые добавки, в которые подмешивают экзогенные или эндогенные ААС, продукты питания, содержащие кленбутирол, например мясо животных, накопившие эндогенные ААС, и пр. Поэтому перед исследователями также стоит задача выявлять подобные источники и предупреждать спортсменов для исключения случаев непреднамеренного приема допинга.

Ученые из Кёльнского университета (г. Кёльн, Германия) и Европейского центра мониторинга распространения допинга (гг. Кёльн, Бонн, Германия) подготовили обзор последних стратегий обнаружения анаболических агентов, опубликованный в Британском журнале спортивной медицины.

Для выявления экзогенных ААС, которые обычно определяются по метаболитам первой и второй фазы в моче, одной из стратегий является продление окна детектирования. Первые публикации, посвященные этому методу, появились в 1996 году. Увеличение периода проверки связано не только с включением в тесты долгосрочных метаболитов экзогенных ААС, но и с более чувствительными способами анализа – хроматография и масс-спектрометрия (такие как метод жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии, газовой хроматографии и тандемной масс-спектрометрии, масс-спектрометрия высокого разрешения).

Благодаря этому число обнаруженных ААС в Кёльнской лаборатории WADA существенно возросло:

  • частота выявления метандиенона выросла более чем на 400% (от 12-15 случаев в 2003-2005 годах до 68 в 2006 г.) при приблизительно том же количестве и качестве проб. Это больше, чем во всех вместе взятых лабораториях WADA, где не включали в анализ долгосрочные метаболиты;
  • дегидрохлорметилтестостерон был выявлен в 82 случаях в 2013 г., хотя до этого он обнаруживался в среднем 1 раз в год;
  • станозолол, ранее выявлявшийся в среднем 23 раза в год, за период с декабря 2012 по декабрь 2013 был обнаружен 182 раза.

Для обнаружения долгосрочных метаболитов применяются различные высокоточные методики, включая фракционирование и выявление дейтерированных стероидов с применением масс-спектрометрии соотношения изотопов водорода, для чего анализируемого вещества нужно лишь 0,5 нг/мл.

Для выявления так называемых «дизайнерских» стероидов, модифицированных с целью обхождения допинг-контроля, новой стратегией является включение в традиционные тесты двух подходов: опосредованный и косвенный.

Опосредованный метод заключается в анализе характеристичных и общих (распространенных) фрагментарных/дочерних ионов, получаемых от сохраненного ядра ААС. Эта стратегия помогла выявить 11 случаев применения метилтриенолона (метилтренболона), аналога тренболона, в 2008 году перед Олимпийскими играми в Пекине. Недостатком этого метода является малая чувствительность: если при нацеленном поиске определенных стероидов достаточно 5 пг/мл, то при анализе общих для группы ионов необходим объем 10-20 нг/мл.

Косвенный метод поиска измененных ААС состоит в наблюдении эндокринологической реакции организма на них и изменении профиля эндогенных стероидов в моче, которые фиксируются в биологическом паспорте спортсмена. Хорошо известно, что использование ААС приводит к пониженному выведению естественных гормонов. Таким образом был обнаружен норболетон в 2002 году, когда необычный стероидный профиль вызвал подозрение, что использовался неопознанный ААС. Конечно, подозрение не является доказанным случаем применения допинга, и еще предстоит определить конкретный препарат, но тем не менее результаты косвенного метода крайне важны для последующего пристального изучения проб.

Биологический паспорт спортсмена и масс-спектрометрия изотопных соотношений применяются и для контроля эндогенных ААС. Среди различных показателей естественного стероидного профиля хорошо исследованным является соотношение тестостерона и эпитестостерона (Т/Э). Применение эндогенных ААС в качестве допинга приводит к значительному повышению данного параметра. Первоначально задачей было выявление нормальных и отклоняющихся от нормы стероидных профилей, в основе чего лежали общие референсные пределы. Но с накоплением опыта и знаний о естественных отклонениях уровней гормонов (и соотношения Э/Т) появилась концепция индивидуальных референсных диапазонов. Это было необходимо, чтобы спортсмены с высоким природным уровнем тестостерона не обвинялись в использовании допинга.

Метод сравнения общих и индивидуальных стероидных профилей привел к большому допинг-скандалу на Азиатских играх в 1994 году, когда 9 золотых медалистов были обвинены в использовании дигидротестостерона.

Для обобщения полученной информации ВАДА разработало базу данных АДАМС (ADAMS), содержащую биологические паспорта из всех аккредитованных лабораторий. Вместе с новейшими исследованиями о влиянии на стероидный профиль различных факторов (лекарственных, генетических, патологических и др.) и применением масс-спектрометрии изотопных соотношений (для распознавания природных и синтетических эндогенных стероидов) эта стратегия стала очень эффективным способом выявления злоупотреблений эндогенными ААС.

Селективные модуляторы андрогенных рецепторов (SARMs) превентивно запрещены ВАДА с 2008 года из-за их анаболических свойств, возможности стимуляции андрогенных рецепторов мышц и костей, а также подавления активности рецепторов иных органов (кожи, простаты и пр.). Хотя эти лекарственные средства только разрабатывались и еще не поступили в продажу, первые публикации, посвященные анализу арилпропионамидных модуляторов (таких как Andarine и Ostarine) появились в 2006 году. За последующие годы большое число разнообразных модуляторов было описано в научных статьях и патентах, включая вопросы их отслеживания в стандартных спортивных пробах (кровь, моча и пр.), требующие для решения химический синтез, так как референсного материала мало или он недоступен.

Метаболизм селективных модуляторов исследовался как в лабораторных, так и естественных условиях на животных для того, чтобы выявить потенциальные аналиты, которые можно эффективно находить в моче при допинг-контроле. С помощью накопленных знаний Андарин был обнаружен на допинг-контроле уже в 2010 и 2011 годах. Это показывает важность превентивных исследований потенциально опасных веществ, но в то же время подчеркивает, что все это – комплексная задача, решаемая только глобальным сотрудничеством ВАДА и фармацевтической промышленности.

Для борьбы с проблемой непреднамеренного допинга (случайного приема ААС) проводятся исследования и поиск источников с целью информирования спортсменов. С 2003 года появилось огромное количество добавок спортивного питания, обещающих невероятные результаты в гипертрофии мышц и развитии силы. Согласно их рекламе эффект обусловлен новейшими ингредиентами и формулами их сочетания, но анализ многих показал, что они содержат экзогенные ААС (такие как метандиенон, станозолол, оксандролон и дегидрохлорметилтестостерон) в терапевтических, или даже превышающих терапевтические, дозах. Также в спортивных добавках встречается кленбутерол из-за его жиросжигающих эффектов. Применение таких продуктов связано с риском для здоровья и неизбежно приводит к положительному допинг-тесту. Для предотвращения этого рекомендуется обучать спортсменов избегать добавок, обещающих экстремальные результаты.

За последние 3 года участились случаи непредумышленного приема допинга при потреблении в пищу мяса, выращенного в некоторых странах с применением кленбутерола. Это может привести не только к провалу допинг-теста, но и к серьезному отравлению. В 2010 и 2011 годах неожиданное обнаружение кленбутерола у теннисистов и футболистов повлекло расследование, которое выяснило, что постоянное или даже временно проживание в Китае и Мексике сопряжено с высоким риском непреднамеренного приема этого препарата. Главный предполагаемый источник – мясо, но и другие продукты животного происхождения (молоко, потроха) не исключают опасности. Те же риски возможны и в других странах. Андидопинговые организации разрабатывают методики распознавания кленбутерола, полученного случайно с пищей и принимаемого умышленно. Одной из них может стать анализ волос.

Подобным образом дела обстоят с обнаруживаемым в допинг-тесте зеранолом: его источником может стать неумышленный прием гриба микотоксина зеараленона. Но с помощью анализа метаболитов удается определять происхождение зеранола в подозрительных случаях.

Необычный источник эндогенных ААС был зафиксирован в 2011 году в Германии: на Кубке мира пять футболисток FIFA показали положительные результаты в допинг-тесте. Изменения в стероидном профиле были обусловлены приемом экстракта мускусных желез оленя.

Эти животные продукты содержали большие уровни 16 различных эндогенных гормонов, 9 из которых входили в Запрещенный список ВАДА 2011 года. Команда принимала данную добавку для повышения психологической устойчивости, будучи не в курсе возможного срыва допинг-теста.

Все эти примеры показывают, что андидопинговым организациям необходимо не только разрабатывать методы поимки нечестных спортсменов, но также предупреждать и доказывать невиновность атлетов, которые не собирались принимать запрещенные препараты.

Ключевые слова: биопаспорт, биохимия, допинг, методы диагностики

18 Июн 2014 г.

Источник


  • Geyer H, Schänzer W, Thevis M. Anabolic agents: recent strategies for their detection and protection from inadvertent doping. Br J Sports Med. 2014, vol.48, N.10, pp.820-826. [Fulltext PDF]




Реклама на сайте









Rambler's Top100

Кодекс этики врачей Рунета